B-Myb Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401318-ACT

MYBL2 codifica o fator de transcrição humano B-Myb, um regulador da família Myb necessário para a progressão do ciclo celular e para programas de expressão gênica associados à proliferação. O B-Myb favorece a entrada na fase S e a progressão mitótica ao coordenar redes transcricionais que se cruzam com a atividade de CDKs, a sinalização dependente de E2F e processos de replicação e reparo do DNA. A expressão desregulada de MYBL2 tem sido associada à instabilidade genômica e a alterações no controle de checkpoints, e frequentemente está ligada a fenótipos proliferativos em diversos contextos relevantes para o câncer. Como regulador transcricional nuclear, o B-Myb é comumente estudado por seu papel na expansão de linhagens, respostas ao estresse e no controle transcricional de módulos gênicos de G2/M.

B-Myb O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYBL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

B-Myb O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYBL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYBL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de B-Myb. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYBL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de B-Myb no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via B-Myb em células tumorais com expressão de MYBL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.