B-ATF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401553-ACT

BATF（B-ATF）は、JUNファミリータンパク質とヘテロ二量体を形成し、AP-1様の制御配列に結合する塩基性ロイシンジッパー型転写因子であり、系譜特異的な遺伝子発現プログラムの形成に関与します。ヒト免疫細胞においてBATFは、T細胞の分化とエフェクター機能を制御する主要な調節因子で、サイトカイン産生を制御する経路、濾胞性ヘルパーT細胞（Tfh）の生物学、適応免疫の活性化などに関わります。BATFはIRFファミリー分子と複合DNAモチーフ上で協調することで、クロマチンのアクセシビリティや転写ネットワークに影響を与え、免疫シグナル伝達および細胞ストレス応答を調整します。BATF活性の異常は免疫表現型の変化と関連し、炎症性疾患の機序やリンパ系の文脈における腫瘍性の転写状態にも関与することが示唆されており、転写制御の機構研究における有用な結節点（ノード）となります。

B-ATF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BATFの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

B-ATF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BATF 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBATF転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性B-ATFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBATF遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるB-ATF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBATF発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるB-ATF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。