Plasmide CRISPR d'Activation (h) Attractin: sc-406420-ACT

Le gène humain **ATRN** code l’attractine, une glycoprotéine transmembranaire impliquée dans la communication des cellules immunitaires et la régulation de l’inflammation, notamment via des rôles dans les interactions entre lymphocytes T et monocytes ainsi que dans la modulation de l’adhérence cellulaire induite par les chimiokines. L’attractine a été liée à la biologie de la signalisation mélanocortinergique par des interactions avec des voies associées à l’agouti, et elle est associée à des processus qui façonnent la dynamique de la surface cellulaire et l’engagement de ligands extracellulaires. En influençant le comportement de la synapse immunologique et les signaux de trafic des leucocytes, **ATRN** est pertinent pour les études de la neuroinflammation et de la dérégulation immunitaire, et il est également étudié dans des contextes où des interactions cellule–cellule altérées contribuent à des phénotypes pathologiques.

Attractin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATRN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Attractin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATRN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATRN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Attractin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATRN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Attractin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Attractin dans les cellules tumorales présentant une expression de ATRN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.