ATR Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-434115-ACT

O gene Atr de camundongo codifica a ATR, uma quinase de serina/treonina do tipo PI3K que coordena a resposta a danos no DNA durante o estresse replicativo. A ATR é ativada em regiões de DNA de fita simples recobertas por RPA e sinaliza por meio de efetores como a CHK1 para estabilizar forquilhas de replicação paralisadas, regular o disparo de origens de replicação e impor checkpoints intra-S e G2/M. Essa via preserva a integridade do genoma ao promover o reparo do DNA e controlar a progressão do ciclo celular, conectando-se a processos como recombinação homóloga, proteção da forquilha de replicação e regulação da apoptose. A desregulação da sinalização de ATR está associada a fenótipos de instabilidade genômica e é amplamente estudada no contexto da biologia do câncer e de distúrbios do desenvolvimento ligados a falhas no controle de checkpoints de dano ao DNA.

ATR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Atr sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ATR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Atr em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Atr, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ATR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Atr nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ATR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ATR em células tumorais com expressão de Atr silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.