ATP5J Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419251-ACT

Atp5j codifica a ATP5J (também conhecida como F6), uma pequena subunidade acessória da ATP sintase mitocondrial F1Fo (Complexo V) que auxilia na montagem e no acoplamento eficiente do fluxo de prótons à produção de ATP durante a fosforilação oxidativa. Ao modular a bioenergética mitocondrial, a ATP5J contribui para a manutenção do equilíbrio celular ATP/ADP, do potencial de membrana mitocondrial e da flexibilidade metabólica diante de demandas energéticas variáveis. Alterações na função da ATP sintase e na atividade subsequente da cadeia respiratória estão associadas a fenótipos de disfunção mitocondrial que afetam tecidos de alta demanda energética e se relacionam com estresse oxidativo e processos ligados à apoptose. Em modelos murinos, alterações na produção mitocondrial de ATP são frequentemente exploradas para estudar mecanismos relevantes para a biologia de doenças neuromusculares, cardíacas e metabólicas no nível de vias mitocondriais.

ATP5J O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Atp5j sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ATP5J O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Atp5j em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Atp5j, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ATP5J. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Atp5j nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ATP5J no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ATP5J em células tumorais com expressão de Atp5j silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.