ATP5B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401009-ACT

ATP5Bは、ミトコンドリアATP合成酵素（複合体V）のβサブユニットをコードしており、酸化的リン酸化の過程でプロトン駆動力をATP産生に結び付けるF1セクターの中核的な触媒構成要素です。ATP5Bは細胞のエネルギー代謝とミトコンドリア膜電位の維持を支えることで、活性酸素種（ROS）の恒常性、アポトーシス感受性、代謝適応といったプロセスに影響します。ATP5Bを含むATP合成酵素サブユニットの発現や機能の変化は、神経変性、心血管・代謝ストレス、がんに関連する代謝リプログラミングなどで観察されるミトコンドリア機能障害の表現型と関連付けられており、ミトコンドリア生物学の研究における一般的な指標の一つとなっています。そのためATP5Bは、電子伝達系の活性とATP需要、ミトコンドリアの品質管理、ストレス応答シグナル伝達を結ぶ経路の解析で、しばしば検討対象となります。

ATP5B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATP5Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ATP5B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATP5B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATP5B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ATP5Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATP5B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるATP5B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATP5B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるATP5B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。