ATP11B Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-411692-LAC

ATP11B codifica uma flippase de fosfolipídios do tipo P4-ATPase que ajuda a manter a assimetria lipídica das membranas plasmática e de organelos ao translocar aminofosfolipídios através de bicamadas de forma dependente de ATP. Ao regular a composição da membrana, a ATP11B influencia a formação de vesículas, o tráfego endossomal e processos de reciclagem que se cruzam com o transporte Golgi–endossomo e com dinâmicas mais amplas da via secretora. A perturbação da assimetria lipídica e do tráfego pode afetar a sinalização, a polaridade celular e respostas ao stress, tornando a ATP11B relevante para estudos de homeostase de membranas e fenótipos associados ao transporte. Alterações na atividade ou na expressão de ATP11B têm sido examinadas no contexto de comportamentos celulares relevantes para doenças, como o processamento de fármacos, a sobrevivência sob stress e mudanças na distribuição intracelular de proteínas de membrana.

As Partículas de Ativação Lentivirais ATP11B (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ATP11B numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ATP11B (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ATP11B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ATP11B. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ATP11B e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.