Atg3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403308-ACT

ヒトATG3はAtg3をコードしており、Atg3はLC3/ATG8の脂質化を触媒してオートファジー小胞（オートファゴソーム）膜の伸長を促進する、オートファジーに必須のE2様酵素です。ATG7の下流で機能するAtg3は、LC3のホスファチジルエタノールアミン（PE）への結合（コンジュゲーション）を支え、プロテオスタシス、オルガネラの品質管理、ストレス適応を協調させる栄養状態センシングからの入力を統合します。ATG3依存的オートファジーの破綻は、ミトコンドリア恒常性の変化、炎症シグナル伝達、ならびにがん生物学や神経変性に関わる細胞生存プログラムの変調と関連づけられています。オートファジーの中心的エフェクターとして、ATG3は経路フラックス、選択的オートファジー機構、そしてアポトーシスや自然免疫経路とのクロストークを解明するために頻繁に研究されています。

Atg3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATG3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Atg3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATG3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATG3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Atg3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATG3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAtg3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATG3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAtg3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。