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Atg16慢病毒激活颗粒(m2) | sc-429488-LAC-2 | 200 µl | $455.00 |
小鼠Atg16l1基因编码ATG16,是ATG12–ATG5–ATG16L1复合体的核心组成部分,该复合体在巨自噬过程中决定自噬体的形成,并在新生吞噬泡(phagophore)处促进LC3的脂质化;ATG16L1协调选择性自噬与基础自噬,参与细胞质质量控制、细胞器更新及抗微生物应答,并进一步影响先天免疫信号传导和上皮屏障稳态;Atg16l1的遗传或功能性扰动与炎症表型和肠道病理相关,因此常被用作构建自噬相关免疫失衡模型的靶点;在小鼠细胞或体内系统中对Atg16l1进行基因编辑,可用于在相关组织中开展自噬体生物发生、宿主–微生物互作以及应激反应通路的机制研究。
Atg16 慢病毒激活颗粒(m2)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Atg16l1 表达。
Atg16 慢病毒激活颗粒(m2)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Atg16l1转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性Atg16表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Atg16l1 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。