ATF4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419228-ACT

O gene Atf4 de camundongo codifica o fator de transcrição ativador 4 (ATF4), um fator de transcrição bZIP responsivo ao estresse que integra sinais da resposta integrada ao estresse e da resposta a proteínas mal enoveladas para remodelar programas de expressão gênica. O ATF4 é induzido a jusante da fosforilação de eIF2α e coordena o metabolismo de aminoácidos, a homeostase redox e da glutationa, a autofagia e vias adaptativas de sobrevivência durante limitação de nutrientes, estresse do RE e hipóxia. Por meio de crosstalk com a sinalização PERK–eIF2α, mTOR e estresse oxidativo, o ATF4 influencia a diferenciação celular e a função mitocondrial em múltiplos tecidos. A atividade desregulada de ATF4 tem sido associada a adaptação patológica ao estresse e a fenótipos inflamatórios e metabólicos, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de proteostase e modelos murinos de doenças relacionadas ao estresse.

ATF4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Atf4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ATF4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Atf4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Atf4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ATF4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Atf4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ATF4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ATF4 em células tumorais com expressão de Atf4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.