ATF-6α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400259-ACT

ATF6 codifica o fator de transcrição ativador 6α, um fator de transcrição bZIP ancorado à membrana do retículo endoplasmático (RE) que atua como um dos principais sensores e efetores da resposta a proteínas mal dobradas (UPR). Diante de estresse no RE, o ATF-6α é transportado para o complexo de Golgi para proteólise intramembranar regulada, liberando um fragmento nuclear que induz genes envolvidos na chaperonagem no RE, na degradação associada ao RE (ERAD) e na proteostase. Por meio de interações cruzadas com as vias de sinalização PERK–eIF2α–ATF4 e IRE1–XBP1, o ATF-6α coordena o remodelamento adaptativo da capacidade da via secretora e a resiliência celular ao estresse. A sinalização desregulada de ATF6/UPR está implicada em contextos como disfunção metabólica, inflamação, neurodegeneração e adaptação de células tumorais ao estresse, tornando o ATF6 um ponto útil para estudos mecanísticos de proteostase e sinalização de estresse.

ATF-6α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ATF6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ATF-6α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ATF6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ATF6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ATF-6α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ATF6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ATF-6α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ATF-6α em células tumorais com expressão de ATF6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.