Ataxin-3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-417498-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Ataxin-3O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Ataxin-3 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Ataxin-3 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ATXN3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Ataxin-3 Anticorpo (A-7): sc-398114
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Ataxin-3 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-417498-NIC | 20 µg | $410.00 |
ATXN3 codifica a ataxina-3, uma enzima desubiquitinante que edita cadeias de ubiquitina por meio do seu domínio catalítico Josephin e de múltiplos motivos de interação com ubiquitina, influenciando assim o fluxo do sistema ubiquitina–proteassoma e o controlo de qualidade proteica. A ataxina-3 participa em redes de proteostase ligadas à degradação associada ao RE, às respostas ao stress e à eliminação de substratos mal dobrados ou propensos à agregação, com efeitos a jusante na regulação transcricional e na organização do citoesqueleto. A expansão de poliglutamina em ATXN3 promove um ganho de função tóxico e a agregação proteica associada à ataxia espinocerebelar tipo 3 (doença de Machado–Joseph), tornando o ATXN3 um locus amplamente utilizado para o estudo de vias relevantes para a neurodegeneração. Em modelos celulares, a perturbação de ATXN3 permite a investigação mecanística da sinalização por ubiquitina, do processamento de agregados e de fenótipos de vulnerabilidade neuronal.
Ataxin-3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ATXN3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ATXN3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ATXN3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ATXN3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.