Ataxin-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403590-ACT

ATXN2 codifica a Ataxina-2, uma proteína ligante de RNA que se associa a polirribossomos e a grânulos de estresse para regular a estabilidade do mRNA, a tradução e as respostas celulares ao estresse. Por meio de interações com fatores do metabolismo de RNA e com a maquinaria de controle translacional, a Ataxina-2 influencia a proteostase e programas de sinalização que moldam a homeostase neuronal e metabólica. Alterações na função e na expressão de ATXN2 estão implicadas em fenótipos neurodegenerativos, incluindo a ataxia espinocerebelar tipo 2 e a modificação do risco genético na esclerose lateral amiotrófica, conectando essa proteína a vias que regem a integridade sináptica e a tradução adaptativa ao estresse. Como um nó que conecta o processamento de RNA e a biologia da resposta ao estresse, ATXN2 é amplamente estudado em modelos de neurotoxicidade, agregação proteica e homeostase celular.

Ataxin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ATXN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ataxin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ATXN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ATXN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ataxin-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ATXN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ataxin-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ataxin-2 em células tumorais com expressão de ATXN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.