AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418156-ACT

AGTR2 codifica o recetor da angiotensina II do tipo 2 (AT2), um GPCR de sete hélices transmembrana no sistema renina–angiotensina que contrabalança a sinalização mediada por AT1. Após a ligação da angiotensina II, o AT2 modula vias acopladas a proteínas G e associadas à β-arrestina, sendo frequentemente relacionado com a sinalização de óxido nítrico/cGMP, a ativação de fosfatases e a regulação da atividade de MAPK, moldando programas celulares que influenciam a diferenciação, o crescimento de neuritos, a inflamação e a remodelação tecidular. A expressão e a sinalização de AGTR2 são estudadas em biologia vascular e em contextos do desenvolvimento, e são frequentemente investigadas em modelos de remodelação associada à hipertensão, respostas a lesão cardiovascular, mecanismos de doença renal e crosstalk de sinalização em células cancerígenas. Como o output do recetor depende fortemente do contexto, a perturbação controlada dos níveis endógenos de AGTR2 é útil para dissecar o viés de via e a dinâmica recetor–ligando em tipos celulares relevantes.

AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AGTR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AGTR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AGTR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AGTR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2 em células tumorais com expressão de AGTR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.