Plasmide Double Nickase (h) ASPP1: sc-404330-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ASPP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ASPP1 Double Nickase (h) et le plasmide ASPP1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PPP1R13B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ASPP1 Antibody (LX011): sc-53903
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ASPP1 | sc-404330-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ASPP1 | sc-404330-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP1R13B code pour la protéine stimulant l’apoptose p53 1 (ASPP1), un régulateur de la transcription induite par le stress qui module l’activité de la famille p53 et influence les décisions de destin cellulaire. ASPP1 favorise des programmes transcriptionnels associés à l’apoptose et au contrôle du cycle cellulaire en facilitant le recrutement de p53/p63/p73 sur certains promoteurs cibles, en lien avec les voies de réponse aux dommages de l’ADN et la signalisation des points de contrôle. À travers ces fonctions, PPP1R13B a été étudié dans le contexte d’une compétence apoptotique altérée, de l’atténuation des voies suppresseurs de tumeurs et, plus largement, de la dérégulation de réseaux transcriptionnels pertinents pour la transformation oncogénique. Son rôle régulateur en fait également un outil utile pour disséquer la manière dont les sorties de p53, spécifiques au contexte, sont façonnées par la disponibilité des cofacteurs et l’état de la chromatine.
ASPP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PPP1R13B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PPP1R13B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PPP1R13B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PPP1R13B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.