ASH2L CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423846

概要

Ash2l は、クロマチン状態と転写プログラムを制御する SET1/MLL ヒストン H3K4 メチルトランスフェラーゼ複合体の中核構成因子である ASH2L をコードします。ASH2L は H3K4 メチル化の制御を通じて、RNA ポリメラーゼ II 依存的な遺伝子発現、エンハンサー活性、発生および分化の過程における細胞アイデンティティのエピジェネティックな維持に寄与します。ASH2L 依存的なクロマチン制御は、細胞周期の進行、DNA 損傷応答、系譜決定を司る経路とも交差しており、幹細胞生物学や造血の研究において重要です。ASH2L あるいは MLL/SET1 複合体活性の破綻は、がん原性の転写状態や発生異常に関与すると示唆されており、エピジェネティクスに焦点を当てた疾患モデルにおける機序解明の要所（メカニスティック・ノード）として有用です。

ASH2L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAsh2l遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ash2l内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ash2lのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ASH2Lタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ASH2Lシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ash2l欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ASH2Lの機能に不可欠なAsh2lエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ash2lゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ASH2L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびASH2L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ash2l遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ASH2L HDRプラスミド（m）および ASH2L HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAsh2lホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAsh2l標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。