ASB-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425766-ACT

O gene Asb2 de camundongo codifica a ASB-2, uma subunidade de reconhecimento de substratos contendo caixa SOCS de complexos de ligase E3 de ubiquitina Cullin5/Rbx2, que ajuda a direcionar proteínas específicas para ubiquitinação e degradação pelo proteassoma. A ASB-2 está implicada na regulação de programas de diferenciação hematopoética e mieloide ao modular a estabilidade de efetores de sinalização e de transcrição que controlam o comprometimento de linhagem e a maturação celular. Por meio da proteostase dependente de ubiquitina, a ASB-2 contribui para vias que governam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e as respostas ao estresse. A atividade desregulada da ASB-2 e o desequilíbrio das ligases de ubiquitina são amplamente relevantes para estudos de mecanismos de doenças hematológicas, estados inflamatórios e biologia do câncer, nos quais redes de degradação proteica influenciam o destino celular.

ASB-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Asb2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ASB-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Asb2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Asb2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ASB-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Asb2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ASB-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ASB-2 em células tumorais com expressão de Asb2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.