ARX CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402055-ACT

ARX（aristaless related homeobox）は、前脳の発生過程において、神経前駆細胞の増殖、介在ニューロンの分化、ならびに領域パターニングに必要な遺伝子発現プログラムを制御するホメオボックス型転写因子をコードしています。ARXは、配列特異的なDNA結合と共調節複合体との相互作用を介して、ニューロンの移動や成熟に影響する転写ネットワークを統括します。ARX活性の異常は、X連鎖知的障害やてんかん関連表現型を含む神経発達障害と関連しており、発生期の遺伝子制御を研究する上で頻繁に注目される標的となっています。ヒト細胞モデルでは、ARXは、転写因子の発現量や発現タイミングが系譜決定をどのように形成するかを検証するための、扱いやすいノードを提供します。

ARX CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARXの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ARX CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARX 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARX転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ARXの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARX遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるARX依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARX発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるARX経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。