Plásmido CRISPR de Activación (h) Arp2: sc-401018-ACT

ACTR2 codifica la proteína humana relacionada con la actina Arp2, una subunidad central del complejo Arp2/3 que nuclea filamentos de actina ramificados para remodelar el citoesqueleto. La dinámica de la actina dependiente de Arp2/3 impulsa la formación de lamelipodios, la migración celular, la endocitosis y la fagocitosis, y se coordina con la señalización de GTPasas de la familia Rho y con vías de adhesión para regular la morfogénesis y el tráfico intracelular. A través de su papel en dar forma a las redes de actina, ACTR2 influye en procesos como la motilidad de células inmunitarias, la remodelación de la barrera epitelial y el transporte vesicular, lo que lo hace relevante para estudios de invasión, fenotipos asociados a metástasis y disfunción neurodelarrollativa o del citoesqueleto. Las alteraciones en las vías de ensamblaje de actina se observan con frecuencia en cánceres y contextos inflamatorios, y ACTR2 ofrece un punto de entrada mecanístico para desentrañar estos cambios vinculados al citoesqueleto.

Arp2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ACTR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Arp2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ACTR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ACTR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Arp2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ACTR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Arp2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Arp2 en células tumorales con expresión de ACTR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.