ARMCX1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407214-ACT

ARMCX1（armadillo repeat-containing, X-linked 1）は、ミトコンドリア関連のアルマジロリピートタンパク質をコードしており、細胞種依存的にミトコンドリアの輸送（トラフィッキング）、ダイナミクス、ならびに品質管理の調節に関与すると考えられています。ARMCX1は、細胞骨格やオルガネラの位置決め機構との相互作用を介して、神経突起の伸長、細胞ストレス応答、ミトコンドリア恒常性の維持といった過程に関連づけられています。ARMCXファミリーの活性変化は、アポトーシスの異常制御、代謝リモデリング、細胞運動性の変化と関連することが報告されており、ARMCX1は神経生物学やがん関連表現型の研究において重要な標的となります。またX連鎖遺伝子であることから、ARMCX1はヒト細胞モデルにおける性差のある制御や遺伝子量（dosage）効果を検討するうえでも有用な文脈を提供します。

ARMCX1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARMCX1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ARMCX1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARMCX1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARMCX1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ARMCX1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARMCX1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるARMCX1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARMCX1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるARMCX1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。