ARK-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423198

Visão geral

Aurka codifica a quinase de serina/treonina ARK-1 (quinase Aurora A), um regulador central da maturação do centrossomo, da entrada em mitose e da montagem do fuso bipolar em células de camundongo. A ARK-1 coordena eventos de fosforilação que sustentam a dinâmica dos microtúbulos e a segregação cromossômica, atuando em redes de controle do ciclo celular que incluem a progressão mitótica dependente de PLK1 e CDK1 e a vigilância de checkpoints. A atividade desregulada de Aurka compromete a estabilidade genômica e tem sido associada a fenótipos de proliferação anormal relevantes para a transformação oncogênica e a aneuploidia. Como resultado, Aurka é amplamente utilizada como um nó mecanístico para estudar a fidelidade mitótica, defeitos na montagem do fuso e respostas ao estresse ligadas ao ciclo celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ARK-1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Aurka em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Aurka, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Aurka na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ARK-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Aurka para a investigação da sinalização de ARK-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Aurka críticos para a função ARK-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Aurka para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ARK-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo ARK-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Aurka. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ARK-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR ARK-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Aurka para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Aurka definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.