ARID3A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-404552-ACT-2

O gene humano ARID3A codifica um fator de transcrição de ligação ao DNA contendo um domínio de interação com regiões ricas em AT, que regula a acessibilidade da cromatina e programas de expressão gênica envolvidos na especificação de linhagens, particularmente durante o desenvolvimento de células B e na regulação de genes de imunoglobulinas. O ARID3A participa de redes de controle transcricional que governam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e a remodelação epigenética por meio de interações com elementos promotores/realçadores (enhancers) e complexos correuladores. A expressão ou atividade desregulada de ARID3A tem sido associada à diferenciação hematopoética aberrante e à sinalização imune, sendo frequentemente estudada no contexto de programas transcricionais oncogênicos e de assinaturas gênicas associadas à autoimunidade. A edição gênica de ARID3A em células humanas permite a dissecação mecanística de dependências de ligação de fatores de transcrição, da função de enhancers e do reprogramamento de vias a jusante, utilizando ensaios como RNA-seq, ATAC-seq, ChIP-seq e modelos funcionais de diferenciação.

ARID3A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARID3A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ARID3A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARID3A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARID3A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ARID3A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARID3A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ARID3A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ARID3A em células tumorais com expressão de ARID3A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.