ARID2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401863-NIC

ARID2（AT-rich interaction domain 2）は、ヌクレオソームの配置を調節して転写、エンハンサー活性、クロマチンアクセシビリティを制御する、PBAF（SWI/SNF）ATP依存性クロマチンリモデリング複合体のDNA結合サブユニットをコードします。これらの機能を通じて、ARID2はゲノム全体にわたる遺伝子発現ネットワークを形成し、細胞周期プログラム、系譜（分化系統）の決定、DNA損傷応答の制御に寄与します。ARID2の欠失または変化はエピジェネティック制御を乱し、複数の腫瘍タイプで観察される異常な転写状態と関連していることから、クロマチンリモデリング依存性を研究するうえで有用な標的となっています。さらにARID2は、ゲノム構造化や転写制御において、標準的（カノニカル）なBAF複合体とは異なるPBAF特異的メカニズムを解明するためのモデル因子としても活用されています。

ARID2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ARID2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ARID2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ARID2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ARID2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。