ARID1A Double Nickaseプラスミド (h): sc-400469-NIC

ARID1A（AT-rich interaction domain 1A）は、ヌクレオソームの配置を調節して転写プログラムを制御する、SWI/SNF（BAF）ATP依存性クロマチンリモデリング複合体の中核サブユニットをコードします。クロマチンのアクセス性を制御することで、ARID1Aはエンハンサー活性、系譜決定に関わる遺伝子発現、DNA損傷応答、ならびに細胞周期の進行とゲノム安定性を形作る複製関連プロセスに影響を与えます。ARID1Aの機能は、エピジェネティック制御やストレス応答性転写を司る経路とも交差しており、PI3K/AKTシグナル伝達やp53関連ネットワークとのクロストークも含まれます。ARID1Aの異常はヒトの多くのがんで高頻度に認められ、クロマチン状態、転写制御の破綻、ならびに腫瘍抑制機能への影響という観点から広く研究されています。

ARID1A ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ARID1A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ARID1A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ARID1Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ARID1Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。