ARHGAP21 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403424-ACT

ARHGAP21 codifica uma proteína ativadora de GTPase (GAP) da família Rho que acelera a hidrólise de GTP em GTPases da família Rho, ajudando a coordenar a remodelação do citoesqueleto de actina, a polaridade celular e o tráfego de membranas. Por meio da modulação da sinalização de RhoA/Cdc42/Rac, a ARHGAP21 influencia processos como migração celular, dinâmica de adesão e transporte associado ao complexo de Golgi, conectando a organização do citoesqueleto às vias de tráfego intracelular. Alterações na sinalização de GTPases Rho estão amplamente implicadas na invasão de células tumorais, no comportamento metastático e em fenótipos vasculares e inflamatórios, tornando a ARHGAP21 um nó útil para estudar o redirecionamento de vias em contextos relevantes para doenças. Pesquisadores frequentemente investigam a função de ARHGAP21 em modelos de desregulação do citoesqueleto, programas de transição epitélio-mesênquima e crosstalk de sinalização que impacta proliferação e motilidade.

ARHGAP21 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARHGAP21 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ARHGAP21 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARHGAP21 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARHGAP21, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ARHGAP21. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARHGAP21 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ARHGAP21 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ARHGAP21 em células tumorais com expressão de ARHGAP21 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.