Plasmide CRISPR d'Activation (h) ARHGAP21: sc-403424-ACT

ARHGAP21 code une protéine activatrice de l’hydrolyse du GTP (GAP) des petites GTPases de la famille Rho, qui accélère l’hydrolyse du GTP sur ces GTPases et contribue ainsi à coordonner le remodelage du cytosquelette d’actine, la polarité cellulaire et le trafic membranaire. En modulant la signalisation RhoA/Cdc42/Rac, ARHGAP21 influence des processus tels que la migration cellulaire, la dynamique d’adhérence et le transport associé à l’appareil de Golgi, reliant l’organisation du cytosquelette aux voies de trafic intracellulaire. Des altérations de la signalisation des GTPases Rho sont largement impliquées dans l’invasion des cellules cancéreuses, le comportement métastatique, ainsi que des phénotypes vasculaires et inflammatoires, ce qui fait d’ARHGAP21 un nœud pertinent pour étudier le remaniement des voies de signalisation dans des contextes pathologiques. Les chercheurs explorent couramment la fonction d’ARHGAP21 dans des modèles de dérégulation du cytosquelette, de programmes de transition épithélio-mésenchymateuse et de crosstalk de signalisation affectant la prolifération et la motilité.

ARHGAP21 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARHGAP21 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ARHGAP21 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARHGAP21 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARHGAP21, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ARHGAP21. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARHGAP21 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ARHGAP21 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ARHGAP21 dans les cellules tumorales présentant une expression de ARHGAP21 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.