ARH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419017

概要

Adprh は ARH1（ADP-リボシルアルギニン加水分解酵素1）をコードしており、タンパク質にアルギニン結合したモノADP-リボースを加水分解する細胞質酵素で、ADP-リボシル化の恒常性維持に寄与します。モノADP-リボシル化を可逆的に戻すことで、ARH1 はストレス応答やDNA損傷シグナル伝達、自然免疫経路、さらに翻訳後修飾のターンオーバーを介したタンパク質機能制御に影響を与えます。ADP-リボース代謝の破綻は、炎症応答の変化、ゲノム維持機構の欠陥、細胞生存プログラムの制御異常と関連付けられています。マウスモデルにおいて Adprh は、可逆的なアルギニンADP-リボシル化が細胞のレジリエンスや疾患関連表現型をどのように形成するかを解析するための、扱いやすい研究入口となります。

ARH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAdprh遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Adprh内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Adprhのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ARH1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ARH1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Adprh欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ARH1の機能に不可欠なAdprhエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Adprhゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ARH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびARH1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Adprh遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ARH1 HDRプラスミド（m）および ARH1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAdprhホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAdprh標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。