ARG-Vasopressin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403139-ACT

AVP codifica a arginina-vasopressina, uma hormona peptídica neuro-hipofisária sintetizada como pré-pró-hormona e processada para regular o equilíbrio hídrico sistémico, o tónus vascular e a homeostase neuroendócrina. Através da sinalização via AVPR2 nas células principais do ducto coletor renal, a vasopressina promove o tráfego dependente de cAMP/PKA da aquaporina-2 para a membrana apical, coordenando respostas antidiuréticas; vias mediadas por AVPR1A contribuem para a vasoconstrição e para uma sinalização mais ampla responsiva ao stress. A desregulação associada ao AVP é relevante para perturbações da osmorregulação e do controlo da pressão arterial, incluindo diabetes insípida central e antidiurese inapropriada, e também é estudada em contextos neuropsiquiátricos e comportamentais devido aos padrões de expressão no SNC. Como gene hipotalâmico rigidamente regulado, o AVP constitui um modelo para estudar transcrição dependente de estímulos, processamento peptídico e biologia das vias secretoras.

AVP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AVP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AVP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AVP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AVP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AVP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AVP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AVP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AVP em células tumorais com expressão de AVP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.