ARF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419191

概要

Arf6 は、細胞膜トラフィッキング、エンドサイトーシス、およびアクチン細胞骨格の再編を制御する低分子GTPアーゼであるADP-リボシル化因子6（ARF6）をコードします。ARF6はGDP結合型とGTP結合型の間を循環することで機能し、小胞リサイクリング、インテグリンのターンオーバー、膜ラッフル形成を協調的に調節して、シグナル入力を細胞形態や運動性のプログラムへと結び付けます。また、ホスホイノシチド代謝およびRhoファミリーGTPアーゼのネットワークと連携し、接着動態や皮質アクチンの組織化を制御します。ARF6シグナルの破綻は、細胞の移動・浸潤表現型の変化、ならびに神経細胞や免疫細胞における膜トラフィッキングの異常と関連することが報告されており、疾患に関連する細胞挙動の機構研究における重要性が示されています。

ARF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるArf6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Arf6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Arf6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ARF6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ARF6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Arf6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ARF6の機能に不可欠なArf6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Arf6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ARF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびARF6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Arf6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ARF6 HDRプラスミド（m）および ARF6 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはArf6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のArf6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。