Arc Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400231-ACT

ARC codifica a proteína associada ao citoesqueleto regulada pela atividade (Arc), um produto de gene de resposta imediata que acopla a atividade neuronal à remodelação sináptica. Arc regula a endocitose de receptores AMPA, a dinâmica do citoesqueleto de actina e a tradução local nas espinhas dendríticas, moldando assim a plasticidade sináptica, a aprendizagem e a memória. Por meio dessas funções, ela se cruza com vias de sinalização dependentes de atividade e com programas homeostáticos de escalonamento sináptico que ajustam a neurotransmissão excitatória. A expressão desregulada de ARC ou o tráfego dependente de Arc têm sido implicados em contextos de pesquisa neuropsiquiátrica e neurodegenerativa, incluindo estudos sobre disfunção cognitiva, suscetibilidade a convulsões e alteração da densidade sináptica.

Arc O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Arc O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Arc. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Arc no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Arc em células tumorais com expressão de ARC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.