ARAP3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405365-ACT

ARAP3 (também conhecido como CENTD3) codifica uma ArfGAP e RhoGAP ligante de fosfoinositídeos que acopla a sinalização da PI3K à regulação coordenada das GTPases ARF6 e da família Rho. Por meio da sua arquitetura multidomínio, o ARAP3 modula o remodelamento do citoesqueleto de actina, o tráfego de membranas, a adesão dependente de integrinas e as respostas quimiotáticas, particularmente em linhagens endoteliais e hematopoéticas. A atividade do ARAP3 interage com vias que governam a migração celular, a morfogênese vascular e a sinalização inflamatória, tornando-o relevante para estudos de angiogênese e tráfego de leucócitos. A desregulação da sinalização por pequenas GTPases e alterações na expressão de ARAP3 têm sido associadas à invasão de células cancerígenas e ao remodelamento do microambiente tumoral, sustentando seu uso como um nó para a investigação mecanística de vias.

ARAP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARAP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ARAP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARAP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARAP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ARAP3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARAP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ARAP3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ARAP3 em células tumorais com expressão de ARAP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.