Aquaporin 8/AQP8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419179

Panoramica

Aqp8 codifica l’acquaporina 8 (AQP8), un canale di membrana che facilita il rapido movimento dell’acqua e può anche contribuire, in tipi cellulari selezionati, al trasporto transmembrana di piccoli soluti neutri come il perossido di idrogeno. Nei tessuti murini, l’espressione di AQP8 è associata alla gestione dei fluidi da parte degli epiteli e alla fisiologia secretoria; inoltre, ne è stata riportata la localizzazione subcellulare sia nella membrana plasmatica sia nelle membrane intracellulari, a supporto di ruoli nell’equilibrio osmotico e nell’omeostasi degli organelli. Influenzando la permeabilità all’acqua e il flusso di soluti legati al redox, AQP8 si inserisce in processi che includono la funzione di barriera epiteliale, la fisiologia mitocondriale e la segnalazione dello stress ossidativo. Un’attività o un’espressione di AQP8 disregolate sono state studiate nel contesto di fenotipi infiammatori e metabolici, della fisiologia epatica e gastrointestinale e di più ampie alterazioni dell’omeostasi redox cellulare rilevanti per i meccanismi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 8/AQP8 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Aqp8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Aqp8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Aqp8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Aquaporin 8/AQP8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Aqp8 per lo studio della segnalazione di Aquaporin 8/AQP8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Aqp8 critici per la funzione di Aquaporin 8/AQP8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Aqp8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Aquaporin 8/AQP8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Aquaporin 8/AQP8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Aqp8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Aquaporin 8/AQP8 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Aquaporin 8/AQP8 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Aqp8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Aqp8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.