Aquaporin 7/AQP7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402564-ACT

AQP7 codifica a aquaporina 7, um canal de membrana do tipo aquagliceroporina que facilita o transporte bidirecional de água e de pequenos solutos neutros, particularmente o glicerol, através da membrana plasmática. Em adipócitos e em tecidos metabolicamente ativos, o efluxo de glicerol mediado por AQP7 contribui para a renovação de triglicerídeos e conecta a lipólise à utilização sistêmica de glicerol, influenciando a homeostase energética celular. A regulação de AQP7 impacta o equilíbrio osmótico, a permeabilidade de membrana e a disponibilidade de substratos metabólicos, em interface com o metabolismo lipídico e com o fluxo de substratos gliconeogênicos. Alterações na expressão ou na função de AQP7 têm sido investigadas em contextos de disfunção do tecido adiposo, fenótipos metabólicos associados à resistência à insulina e manuseio de glicerol específico por tecido, relevantes para a pesquisa cardiometabólica.

Aquaporin 7/AQP7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AQP7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Aquaporin 7/AQP7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AQP7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AQP7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Aquaporin 7/AQP7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AQP7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Aquaporin 7/AQP7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Aquaporin 7/AQP7 em células tumorais com expressão de AQP7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.