Aquaporin 5/AQP5 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400567-NIC

AQP5 codifica a aquaporina 5, um canal de água de membrana que facilita o transporte rápido de água, impulsionado por gradientes osmóticos, através das membranas de células epiteliais e glandulares. Em humanos, a AQP5 contribui para a secreção de fluidos e para o controlo da hidratação nas glândulas salivares e lacrimais e nos epitélios das vias aéreas e alveolares, influenciando a fisiologia da barreira epitelial e a homeostase do líquido na superfície mucosa. A sua regulação cruza-se com processos de sinalização que modulam o tráfego de membrana e o equilíbrio osmótico, incluindo vias associadas ao cálcio e ao AMPc que afetam a localização do canal e a dinâmica do transporte epitelial. Alterações na expressão ou na localização da AQP5 têm sido associadas, na literatura, a disfunção secretora e a desequilíbrios de fluidos no epitélio, relevantes para condições inflamatórias das vias aéreas, disfunção glandular e alterações associadas a tumores na migração celular e na hidratação dos tecidos.

Aquaporin 5/AQP5 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus AQP5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de AQP5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função AQP5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com AQP5 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.