Aquaporin 1/AQP1 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-419172-NIC

O gene Aqp1 de camundongo codifica a aquaporina 1 (AQP1), um canal de membrana tetramérico que medeia um fluxo de água rápido e seletivo através das membranas plasmáticas e sustenta a homeostase osmótica. A AQP1 é altamente expressa no endotélio microvascular e em tecidos epiteliais, onde contribui para o transporte de fluidos transepitelial, a regulação do volume celular e a função fisiológica de barreira. Por meio de seus efeitos sobre a permeabilidade da membrana e sobre gradientes hidrostáticos/osmóticos, a AQP1 influencia processos como a formação de edema, respostas angiogênicas e a secreção de fluidos. Alterações na expressão ou na localização da AQP1 têm sido associadas a defeitos na capacidade de concentração renal, disfunção vascular e desregulação do equilíbrio de fluidos teciduais, relevantes para microambientes inflamatórios e neoplásicos.

Aquaporin 1/AQP1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Aqp1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Aqp1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Aqp1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Aqp1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.