Aquaporin 1/AQP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419172-ACT

O gene Aqp1 de camundongo codifica a Aquaporina 1 (AQP1), um canal de água tetramérico que permite o rápido movimento osmótico de água através das membranas plasmáticas e sustenta a homeostase de fluidos no endotélio microvascular, nos túbulos proximais renais e em outros epitélios especializados no transporte de água. Ao regular o volume celular, o fluxo transcelular de água e gradientes osmóticos locais, a AQP1 influencia processos como a permeabilidade capilar, a secreção e reabsorção epiteliais e o comportamento migratório em determinados tipos celulares. O transporte de água dependente de Aqp1 interage com vias que controlam o manejo de íons e a função de barreira, incluindo a coordenação com transportadores de solutos e a dinâmica das junções oclusivas. Alterações na expressão ou na localização da AQP1 têm sido associadas a desregulação do equilíbrio hídrico e a fenótipos relacionados a edema, tornando-a relevante para estudos de fisiologia renal, permeabilidade vascular e microambientes de fluido tecidual.

Aquaporin 1/AQP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Aqp1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Aquaporin 1/AQP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Aqp1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Aqp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Aquaporin 1/AQP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Aqp1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Aquaporin 1/AQP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Aquaporin 1/AQP1 em células tumorais com expressão de Aqp1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.