AQP11 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403957-ACT

ヒトAQP11はアクアポリン11をコードしており、主に細胞内膜に局在するアクアポリンファミリーの非典型的なメンバーです。AQP11は、細胞内の水および低分子溶質の恒常性維持に寄与します。AQP11の活性は、小胞体の完全性の維持、浸透圧バランスの調節、ならびに細胞ストレス応答やオルガネラ機能に影響するプロテオスタシス経路と関連しています。腎臓やその他の分泌性、あるいは代謝活性の高い組織では、AQP11発現の変化が尿細管細胞の恒常性の破綻や、ストレス関連の障害表現型に対する感受性の増大と関連づけられています。これらの特性により、AQP11は膜輸送、小胞体関連プロセス、ならびに疾患に関連する細胞生理における文脈依存的な役割を解明するための有用な標的となります。

AQP11 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AQP11の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AQP11 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AQP11 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAQP11転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AQP11の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAQP11遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAQP11依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAQP11発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAQP11経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。