Partículas Lentivirales de Activación (h) apoD: sc-402012-LAC

El APOD humano codifica la apolipoproteína D (apoD), una lipocalina secretada que se une a pequeños ligandos hidrofóbicos y los transporta, como el ácido araquidónico, la progesterona y lípidos relacionados con el colesterol. La apoD participa en el tráfico de lípidos y en el metabolismo de las lipoproteínas, e influye en el equilibrio redox celular al limitar la peroxidación lipídica y modular las respuestas al estrés oxidativo. Se expresa en múltiples tejidos, con funciones destacadas en el sistema nervioso, y se estudia con frecuencia en el contexto del envejecimiento, la neuroinflamación, la neurodegeneración y la desregulación metabólica, donde se implican alteraciones del manejo de lípidos y el daño oxidativo. La actividad de APOD se cruza con vías que regulan la remodelación de membranas, la señalización inflamatoria y programas génicos de adaptación al estrés relevantes para los mecanismos de enfermedad, sin que ello implique beneficio terapéutico.

Las partículas de activación lentiviral apoD (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de APOD en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral apoD (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción APOD, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de apoD. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo APOD y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.