apoD Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402012-ACT

O APOD humano codifica a apolipoproteína D (apoD), uma lipocalina secretada que se liga e transporta pequenos ligantes hidrofóbicos, incluindo o ácido araquidônico e lipídios relacionados ao colesterol. A apoD contribui para a homeostase lipídica e para respostas ao estresse celular, com papéis descritos na modulação do dano oxidativo e da sinalização inflamatória em contextos neurais e vasculares. Sua expressão está ligada a processos como o metabolismo de lipoproteínas, a remodelação de membranas e o tráfego extracelular de lipídios. Alterações na regulação de APOD/apoD têm sido associadas na literatura a estados neurodegenerativos e neuroinflamatórios, desregulação metabólica e patologias cardiovasculares, sustentando seu uso como marcador mecanístico em modelos relevantes para doenças.

apoD O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de APOD sem alterar a sequência de ADN subjacente.

apoD O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus APOD em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição APOD, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de apoD. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus APOD nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de apoD no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via apoD em células tumorais com expressão de APOD silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.