Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
apoB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433607
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- apoB Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico apoB, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: apoB Antibody (A-6): sc-393636
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
apoB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-433607 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino **Apob** codifica l’apolipoproteina B (apoB), l’apolipoproteina strutturale essenziale necessaria per l’assemblaggio e la secrezione di lipoproteine ricche di trigliceridi, inclusi chilomicroni e VLDL, e per la successiva formazione delle LDL. ApoB coordina la biogenesi delle lipoproteine nel reticolo endoplasmatico attraverso interazioni con la proteina microsomiale di trasferimento dei trigliceridi, collegando la gestione epatica e intestinale dei lipidi al trasporto sistemico del colesterolo. Regolando numero e composizione delle particelle, apoB influenza l’interazione con i recettori delle lipoproteine, l’assorbimento dei lipidi e la segnalazione metabolica a valle. La disregolazione delle vie dipendenti da APOB è ampiamente utilizzata per modellare nei topi l’iperlipidemia, fenotipi di steatosi epatica e il traffico lipidico rilevante per l’aterosclerosi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO apoB (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Apob in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Apob insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Apob a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina apoB.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Apob per lo studio della segnalazione di apoB, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Apob critici per la funzione di apoB
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Apob per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal apoB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal apoB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Apob. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal apoB Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR apoB (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Apob per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Apob definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.