APG5/ATG5 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-419149-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- APG5/ATG5O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase APG5/ATG5 (m) e o Plasmídeo Double Nickase APG5/ATG5 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Atg5. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:APG5/ATG5 Anticorpo (C-1): sc-133158
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
APG5/ATG5 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-419149-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
APG5/ATG5 Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-419149-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O Atg5 de camundongo codifica APG5/ATG5, um fator central da autofagia necessário para a biogênese de autofagossomos por meio do sistema de conjugação ATG12–ATG5–ATG16L1, que sustenta a lipidização de LC3 e o alongamento do fagóforo. Ao coordenar a macroautofagia, o ATG5 influencia o controle de qualidade citoplasmático, a homeostase mitocondrial e a adaptação ao estresse, com efeitos a jusante na sinalização imune inata e no tônus inflamatório. Alterações na autofagia dependente de ATG5 têm sido associadas, em modelos experimentais, à desregulação da proteostase ligada à neurodegeneração, à suscetibilidade a infecções, à disfunção metabólica e à biologia tumoral. Assim, a perturbação de Atg5 é amplamente utilizada para dissecar mecanismos dependentes de autofagia versus independentes de autofagia em vias de sobrevivência celular, diferenciação e resposta imune.
APG5/ATG5 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Atg5 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Atg5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Atg5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Atg5 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.