Apelin Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424407-ACT

O gene Apln de camundongo codifica a apelina, um peptídeo secretado que atua como ligante do receptor APJ (APLNR) e regula a homeostase cardiovascular, a brotação angiogênica, o equilíbrio de fluidos e a sinalização metabólica. A interação apelina–APLNR modula vias dependentes de GPCR, incluindo PI3K–AKT, MAPK/ERK e respostas endoteliais dependentes de óxido nítrico, moldando o tônus vascular e a migração de células endoteliais. No sistema nervoso central e em tecidos periféricos, a apelina contribui para a regulação neuroendócrina e a homeostase energética por meio de sinalização parácrina coordenada. A desregulação da sinalização Apln/apelina tem sido associada a remodelamento vascular, respostas ao estresse cardíaco e disfunção metabólica, sustentando seu uso como um nó mecanístico em modelos de pesquisa cardiometabólica e relacionados à inflamação.

Apelin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Apln sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Apelin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Apln em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Apln, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Apelin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Apln nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Apelin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Apelin em células tumorais com expressão de Apln silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.