Apelin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401548-ACT

APLN codifica a apelina, um ligante peptídico secretado do recetor APJ (APLNR) que regula o tónus vascular, a angiogénese e a homeostase de fluidos através de sinalização acoplada a proteínas G. A ativação apelina–APJ envolve vias como PI3K/AKT, ERK/MAPK e eNOS/NO, influenciando a função endotelial, a contratilidade cardíaca e a adaptação metabólica em múltiplos tecidos. A desregulação da expressão de APLN tem sido associada à remodelação cardiovascular, à doença vascular pulmonar e a alterações do balanço energético em contextos de obesidade e diabetes. Na biologia tumoral, a sinalização da apelina pode modular respostas à hipóxia e a neovascularização, tornando-a relevante para estudos do controlo microambiental do crescimento e da perfusão.

Apelin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de APLN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Apelin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus APLN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição APLN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Apelin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus APLN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Apelin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Apelin em células tumorais com expressão de APLN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.