AP4A Hydrolase Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-407028-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- AP4A HydrolaseO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase AP4A Hydrolase (h) e o Plasmídeo Double Nickase AP4A Hydrolase (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para NUDT2. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:AP4A Hydrolase Anticorpo (F-5): sc-271410
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
AP4A Hydrolase Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-407028-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AP4A Hydrolase Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-407028-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O NUDT2 codifica a hidrolase humana de Ap4A, uma enzima da família Nudix que hidrolisa o tetrafosfato de diadenosina (Ap4A) e dinucleósidos polifosfatos relacionados para regular a sinalização intracelular de “alarmonas”. Ao controlar a renovação (turnover) de Ap4A, o NUDT2 influencia a homeostase de nucleotídeos e vias responsivas ao estresse que afetam programas de transcrição, o metabolismo de RNA e a progressão do ciclo celular. Alterações na atividade de NUDT2 têm sido associadas na literatura a mudanças na capacidade proliferativa, nas respostas a danos no DNA e em redes de sinalização inflamatória, tornando-o relevante para estudar a remodelação dependente do contexto de cascatas de sinalização em células humanas. Como os níveis de Ap4A podem modular interações proteína–nucleotídeo e a sinalização subsequente por quinases/adaptadores, a perturbação de NUDT2 é útil para dissecar o controle mediado por nucleotídeos das transições de estado celular.
AP4A Hydrolase O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus NUDT2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de NUDT2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função NUDT2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com NUDT2 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.