AP-2β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401846-ACT

TFAP2B codifica o fator de transcrição humano AP-2β, um regulador de ligação ao DNA específico de sequência que modula programas de expressão gênica que controlam a diferenciação celular, a proliferação e o estabelecimento de padrões durante o desenvolvimento. O AP-2β influencia redes transcricionais que se cruzam com a sinalização por fatores de crescimento e com vias que especificam linhagens celulares, moldando respostas dependentes do contexto em tecidos derivados da crista neural e em outros compartimentos do desenvolvimento. Alterações na atividade de TFAP2B têm sido associadas a distúrbios congênitos do desenvolvimento e a estados transcricionais desregulados relevantes para a biologia do câncer, sustentando sua utilidade como um nó para estudar circuitos aberrantes de regulação gênica. Pesquisadores frequentemente investigam o AP-2β para mapear genes-alvo a jusante, definir a lógica enhancer-promotor e entender como a dosagem do fator de transcrição afeta decisões de destino celular.

AP-2β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TFAP2B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AP-2β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TFAP2B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TFAP2B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AP-2β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TFAP2B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AP-2β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AP-2β em células tumorais com expressão de TFAP2B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.