AOF1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405078-ACT

ヒトKDM1B（AOF1）は、FAD依存性のリシン脱メチル化酵素をコードしており、主としてH3K4me1/2マークを除去することでクロマチンのアクセシビリティと転写出力を制御します。ヒストンのメチル化状態を調節することにより、AOF1は分化、ゲノム安定性、生殖細胞系列や初期発生における転写制御など、細胞アイデンティティ・プログラムのエピジェネティック制御に寄与します。KDM1Bの活性は、より広範なクロマチンリモデリングや転写抑制／活性化ネットワークとも連携し、増殖や系譜決定を司る経路に影響を与えます。ヒストン脱メチル化の異常やKDM1B発現パターンの変化は、がんや発生表現型など複数の疾患関連コンテキストで観察されるエピジェネティックな不均衡と関連づけられています。

AOF1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KDM1Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

AOF1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KDM1B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKDM1B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性AOF1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKDM1B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAOF1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKDM1B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAOF1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。