ANP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400723

Descripción general

NPPA codifica el péptido natriurético auricular (ANP), una hormona de origen cardíaco que regula el volumen sanguíneo y el tono vascular a través de los receptores de péptidos natriuréticos y de la señalización downstream cGMP/PKG. El ANP promueve la natriuresis, la diuresis y la vasodilatación, y modula la actividad del eje renina–angiotensina–aldosterona, vinculando la detección del estiramiento miocárdico con la homeostasis sistémica de líquidos y electrolitos. La expresión de NPPA está estrechamente controlada en los cardiomiocitos y se induce de manera dinámica durante la remodelación por estrés cardíaco. La desregulación de la señalización NPPA/ANP se asocia con fisiopatología cardiovascular, incluida la hipertensión, la hipertrofia cardíaca y la insuficiencia cardíaca, lo que la convierte en un nodo clave para estudios mecanísticos de la regulación cardiometabólica y hemodinámica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ANP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NPPA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NPPA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NPPA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ANP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NPPA para la investigación de la señalización de ANP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NPPA críticos para la función de ANP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NPPA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ANP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ANP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NPPA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ANP (h) y el plásmido HDR ANP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NPPA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NPPA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.