ANP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400723-ACT

NPPA codifica o peptídeo natriurético atrial (ANP), um fator endócrino de origem cardíaca que é sintetizado como um pré-pró-hormônio e processado para regular o volume de fluido extracelular e o tônus vascular. O ANP sinaliza principalmente por meio do receptor do peptídeo natriurético A (NPR1/GC-A), elevando o cGMP e ativando vias dependentes de PKG que modulam o manejo renal de sódio, a vasodilatação e o equilíbrio neuro-hormonal. Em cardiomiócitos, a expressão de NPPA é regulada dinamicamente por estresse mecânico e programas de remodelamento, conectando o ANP à sinalização hipertrófica, a redes transcricionais associadas à fibrose e à adaptação hemodinâmica. Alterações na atividade de NPPA/ANP são comumente estudadas no contexto de insuficiência cardíaca, hipertensão e fenótipos cardiometabólicos, nos quais a sinalização por peptídeos natriuréticos e a homeostase de cGMP estão perturbadas.

ANP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NPPA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ANP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NPPA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NPPA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ANP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NPPA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ANP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ANP em células tumorais com expressão de NPPA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.