Plásmido CRISPR de Activación (h) ANP: sc-400723-ACT

NPPA codifica el péptido natriurético auricular (ANP), un factor endocrino de origen cardíaco que se sintetiza como una preprohormona y luego se procesa para regular el volumen de líquido extracelular y el tono vascular. El ANP señala principalmente a través del receptor A de péptidos natriuréticos (NPR1/GC-A) para aumentar el cGMP y activar vías dependientes de PKG que modulan el manejo renal del sodio, la vasodilatación y el equilibrio neurohormonal. En los cardiomiocitos, la expresión de NPPA se regula de forma dinámica por el estrés mecánico y los programas de remodelado, vinculando el ANP con la señalización hipertrófica, redes transcripcionales asociadas a la fibrosis y la adaptación hemodinámica. Las alteraciones en la actividad de NPPA/ANP se estudian con frecuencia en el contexto de insuficiencia cardíaca, hipertensión y fenotipos cardiometabólicos en los que la señalización de los péptidos natriuréticos y la homeostasis del cGMP están perturbadas.

ANP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NPPA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ANP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NPPA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NPPA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ANP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NPPA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ANP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ANP en células tumorales con expresión de NPPA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.