ANO2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404198-ACT

ヒトANO2（anoctamin 2／TMEM16B）は、カルシウム活性化クロライドチャネルをコードしており、電気応答性細胞における膜興奮性とイオン恒常性の調節に関与します。ANO2の活性は細胞内Ca2+シグナルをクロライドのフラックスに結び付け、特に感覚系や神経系の文脈において、刺激誘発性脱分極、後電位、ならびにシグナル適応の形成に寄与します。これらの過程を通じて、ANO2は神経伝達、感覚変換、活動依存的な細胞応答に影響するCa2+依存性シグナル伝達ネットワークに関与します。アノクタミンファミリーのクロライド伝導の変化は、興奮性の制御異常や感覚機能障害と関連づけられており、ANO2はチャネル生物学およびCa2+連動シグナル伝達の機序研究における重要な標的となっています。

ANO2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANO2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ANO2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ANO2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANO2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ANO2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANO2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるANO2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANO2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるANO2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。