ANO10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417456

概要

ANO10（anoctamin 10／TMEM16K）は小胞体（ER）に局在するTMEM16ファミリーの一員で、リン脂質スクランブリングやCa2+制御下の膜ダイナミクスに関与するとされています。ERの恒常性維持、脂質分布、および小胞輸送、オルガネラ間コンタクト部位の機能、ストレス応答シグナル伝達経路などの下流プロセスに寄与します。ANO10の遺伝学的破綻は常染色体劣性の脊髄小脳失調症や関連する神経変性表現型と関連しており、神経細胞の維持や膜脂質制御における役割を支持します。そのためANO10は、神経生物学、ERストレス、脂質介在性シグナル伝達の細胞モデルで研究されています。

ANO10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるANO10遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ANO10内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ANO10のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ANO10タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ANO10シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ANO10欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ANO10の機能に不可欠なANO10エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ANO10ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ANO10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびANO10 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ANO10遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ANO10 HDRプラスミド（h）および ANO10 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはANO10ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のANO10標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。