Ankyrin G Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400421-ACT

O gene humano **ANK3** codifica a **anquirina G**, um adaptador multifuncional que conecta proteínas integrais de membrana ao citoesqueleto de **espectrina–actina**, organizando domínios especializados de membrana e estabilizando complexos proteicos. A anquirina G é essencial para a polaridade e a excitabilidade neuronais por seu papel no agrupamento de canais de sódio voltagem-dependentes e de outros componentes no segmento inicial do axônio e nos nós de Ranvier, e também contribui para a organização da membrana em epitélios. Por meio dessas funções de ancoragem/escaffold, a anquirina G influencia a remodelação do citoesqueleto, o tráfego de membrana e vias de transdução de sinal que coordenam a arquitetura e a comunicação celulares. Estudos genéticos e de expressão associaram a desregulação de **ANK3** a fenótipos neuropsiquiátricos e do neurodesenvolvimento, apoiando sua relevância para pesquisas mecanísticas em circuitaria neuronal e biologia de domínios de membrana.

Ankyrin G O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANK3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ankyrin G O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANK3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANK3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ankyrin G. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANK3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ankyrin G no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ankyrin G em células tumorais com expressão de ANK3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.